在納米抗體的發(fā)現(xiàn)過(guò)程中，對(duì)羊駝進(jìn)行免疫是至關(guān)重要的一步。以下是標(biāo)準(zhǔn)的羊駝免疫流程：

1.抗原制備與優(yōu)化

根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇適當(dāng)?shù)目乖ǖ鞍住㈦?、多糖等），確保高純度、高穩(wěn)定性?？蛇x擇結(jié)合適當(dāng)?shù)淖魟栽鰪?qiáng)免疫反應(yīng)。抗原與佐劑需要等體積充分混合，制成穩(wěn)定乳劑后用于羊駝免疫?？刁w生命采用渦旋振蕩的方式制備抗原乳劑。

抗原的乳化程度直接影響免疫效果，因此乳化后必須進(jìn)行質(zhì)量檢查?？乖c弗氏佐劑乳化后性狀形成油包水，康體生命抗原乳劑檢查的方法是：室溫下將制成的乳劑滴一滴在自來(lái)水表面，質(zhì)量合格的乳劑滴入水面后應(yīng)保持乳滴珠完整不分散。

2.免疫方案設(shè)計(jì)

設(shè)定免疫劑量和免疫周期（通常4-6次，每次間隔7-14天），優(yōu)化免疫策略以產(chǎn)生高親和力的納米抗體。具體免疫周期可參考下表

3.動(dòng)物篩選與健康檢查

選擇健康的青壯年羊駝，確保無(wú)基礎(chǔ)疾病。免疫用的羊駝最好選擇2-3歲的年青成年動(dòng)物，免疫系統(tǒng)發(fā)育成熟。特別要注意避免使用妊娠期的雌性動(dòng)物用于制備免疫抗體。使用曾經(jīng)接受過(guò)免疫的個(gè)體，可獲得更干凈的抗體背景。

免疫前，還應(yīng)采血測(cè)定動(dòng)物體內(nèi)有無(wú)滴度交叉反應(yīng)性天然抗體的存在。為確保動(dòng)物在整個(gè)免疫進(jìn)程中的健康狀態(tài)，需要對(duì)羊駝來(lái)源，飼養(yǎng)環(huán)境需進(jìn)行控制。由于對(duì)免疫應(yīng)答的個(gè)別差異，免疫時(shí)可選用多只動(dòng)物進(jìn)行免疫。

4.免疫注射

采用皮下或肌肉注射方式，每次注射后監(jiān)測(cè)羊駝的健康狀態(tài)，確保免疫過(guò)程安全無(wú)副作用?？刁w生命采用在每次免疫在頸部淋巴結(jié)附近左右兩側(cè)分兩次注射的方式增強(qiáng)免疫效果。

5.血清監(jiān)測(cè)與免疫反應(yīng)評(píng)估

每次免疫后7-10天采血，通過(guò)ELISA等方法檢測(cè)特異性抗體的效價(jià)，判斷羊駝是否產(chǎn)生足夠的免疫應(yīng)答。如果血清總IgG效價(jià)達(dá)到10E5，VHH抗體效價(jià)達(dá)到10E2，則可采血進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建和篩選。如果沒(méi)有達(dá)到，則需要根據(jù)數(shù)據(jù)判斷是否需要加強(qiáng)免疫。

6.最終采血和PBMC分離

在免疫結(jié)束后，進(jìn)行大體積采血（通常50-200mL），從血液中分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）并保存在TRIzol試劑中，用于后續(xù)納米抗體文庫(kù)構(gòu)建和篩選。

康體生命AlpalifeBio

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