所需設(shè)備

帶吊籃式轉(zhuǎn)子的離心機(jī)

無菌離心管

移液器

無菌滴管

試劑制備

D-PBS

Ficoll細(xì)胞分離液

D-PBS，1% BSA

RNAiso plus

以50ml羊駝血的PBMC提取為例：

1. 將采血管中總體積50ml的血液樣品移入2支50ml離心管，并加入50ml D-PBS,緩慢顛倒數(shù)次，混合均勻。

2. 將100ml Ficoll細(xì)胞分離液加入5支50ml離心管，每支20ml。

3. 將20ml稀釋過的血液用滴管小心鋪在20ml Ficoll細(xì)胞分離液的離心管上。鋪樣時(shí)，注意不要使兩種液體混合。

4. 在 18 oC 至 22 °C下以1100xg 離心20 分鐘，并將制動(dòng)器調(diào)制最低檔或關(guān)閉。

5. 使用無菌滴管吸出含有血漿和血小板的上層，使PBMC層在界面處保持原樣。含有血漿的上層可以保存以備后用。

6. 用無菌滴管將PBMC層轉(zhuǎn)移到無菌離心管中。

7. 估計(jì)轉(zhuǎn)移的PBMC體積（通常約5ml）。向離心管中的PBMC中加入至少 3 倍體積的含1%BSA的D-PBS，用移液器輕輕捶打，使細(xì)胞混勻。

8. 在18 oC 至 22 °C 下以1100xg 離心20 分鐘。

9. 去除上清液后，加入20ml含1%BSA的D-PBS，用移液器輕輕捶打，使細(xì)胞混勻。

10. 在18 oC 至 22 °C 下以1100xg 再次離心20分鐘。

11. 去除上清液,用8ml RNAiso plus重新懸浮細(xì)胞，并分裝保存。